Líneas de Investigación – Dr. Flavio Salazar

Dr. Flavio Salazar
Director Alterno
Universidad de Chile

Laboratorio de Inmunología Antitumoral (LIAT)

– LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN EN CURSO

Desarrollo de una nueva vacuna basada en Células Dendríticas contra el Melanoma
Recientemente, hemos desarrollado un método original para la producción de células presentadoras de antígenos tumorales terapéuticas similares a las células dendríticas denominadas TAPCells ®, utilizando un lisado celular alogénico derivado de melanoma (Trimel) como factor de activación y proveedor de antígenos. La inmunoterapia basada en TAPCells es capaz de inducir respuestas inmunes mediadas por linfocitos T y mejorar la supervivencia a largo plazo de los pacientes en estadio IV de la enfermedad en estudios que incluyen más de 100 individuos (López et al 2009, J Clin Oncol,.. Aguilera et al 2011, Clin Cancer Res). Es importante destacar que, el 61% de los pacientes evaluados (58 de 94) mostró una hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) contra Trimel que indica el desarrollo de la memoria inmunológica anti-tumor que se correlaciona con la supervivencia del paciente prolongado. El análisis in vitro de Trimel mostró que contiene patrones moleculares asociados a daño (DAMPs) tales como la proteína nuclear HMBG-1 inducida por choque térmico, capaz de mejorar, a través de TLR4, la maduración de las DC y la presentación cruzada de antígenos. De hecho, un polimorfismo TLR4 se correlacionó con los resultados clínico en los paciente. La respuesta DTH contra Trimel se asoció con la supervivencia prolongada de los pacientes con melanoma en estadio IV respondedoras (DTH +; 35 meses) en comparación con los no respondedores (DTH -; 11 meses). Tomados en conjunto, nuestros resultados indican que la inmunización TAPCells resultó en dos patrones diferentes de respuesta asociada al resultado inmunológico y clínico. Nuestros estudios pueden contribuir a la mejor comprensión de las respuestas inmunológicas clínicos producidos por DC-vacunas y para el desarrollo de mejores vacunas basadas en DC. Con el apoyo de Fondecyt 1090238 y 1090243.

Rol de las Gap Junctions en la citotoxicidad mediada por células NK contra células de Melanoma.
 
Las Gap Junctions (GJs) median las comunicaciones intercelulares a través de la unión de dos hemicanales (Hchs) de células adyacentes. En el sistema inmune, los Hchs están formados por hexámeros de conexinas (Cx), particularmente Cx43. En trabajos anteriores se demostró que las GJs tienen un rol importante en la comunicación entre células dendríticas (DCs) y también entre DCs y Linfocitos T, sin embargo el rol de los canales formados por Cx43 en la citotoxicidad mediada por células Natural Killer (NK) contra células tumorales, no ha sido elucidado aún. Actualmente hemos obtenidos resultados que indican que la polarización de Cx43 aumenta en la sinapsis inmunológica entre células NK y tumorales (melanoma o K562) a medida que aumentan los tiempos de co-cultivo. Interesantemente al bloquear Cx43,la inducción de Calcio,la actividad de granzima-B y la citotoxicidad contra células tumorales disminuyen de manera significativa. Estos resultados sugieren que Cx43 presenta un importante rol en la sinapsis inmunológica citotóxica, participando en la muerte de las células tumorales.
 
Papel de señales de peligro en la generación de células dendríticas terapéuticas.
 
La utilización de lisados tumorales alogénicos generados por ciclos repetitivos de congelación-descongelación, como estrategia de entrega de antígenos (Ags) asociados a tumores para células dendríticas (DCs) utilizadas en protocolos de inmunoterapias anti-tumorales, otorga varias ventajas con respecto a estrategias basadas en Ags peptídicos de naturaleza conocida. Nosotros hemos observado que la estimulación de respuestas a estrés térmico en células de melanoma, previa a la obtención de un lisado celular utilizado como fuente antigénica (TRIMEL), es necesaria para la generación de DCs clínicamente efectivas para el tratamiento de pacientes con melanoma avanzado. Específicamente, determinamos que el shock térmico favorece la generación de señales de peligro, como la secreción de la proteína high mobility group box-1 (HMGB1), que inducen la diferenciación de DCs con una alta capacidad de activar tanto linfocitos T citotóxicos (CTLs) melanoma-específicos como células natural killers (NK). Además observamos que el HMGB1 del TRIMEL colocaliza con el receptor tipo toll-4 (TLR4) expresado en monocitos humanos y tanto el bloqueo de TLR4, como la expresión de una isoforma de unión deficiente a HMGB1 (polimorfismo Asp299Gly), inhiben la capacidad de las DCs de activar los CTLs melanoma-específicos. Relacionado con esta observación, hemos determinado que pacientes con melanoma etapa-IV que poseen el polimorfismo Asp299Gly en TLR4, tienen una mediana de sobrevida post-inmunoterapia menor que aquellos pacientes sin el polimorfismo. Además hemos observado que el TRIMEL induce en las DCs, de manera HMGB1-independiente, la expresión de la proteína de gap junctions (GJs) conexina43 (Cx43). Esta inducción se asocia a un mayor acoplamiento mediado por GJs entre las DCs y las células NK, y la comunicación mediada por GJs entre estas células favorece la activación mediado por las DC de las células NK. Finalmente, hemos observado que las células NK acumulan Cx43 en las sinápsis inmunológicas líticas establecidas con células tumorales, permitiendo el acoplamiento entre ambas y contribuyendo a una eficiente actividad citotóxica mediada por granzima-B.

– PUBLICACIONES MÁS RELEVANTES

Durán C., Segal G., Salazar L., Pereda C., Falcón C., Tempio F., Aguilera R., González R., Pérez C.,Tittarelli A., Catalán D., Salazar-Onfray F., López M.N. (2012). The immunological and Clinical Outcomes of DC-Vaccinated Melanoma Patients Are Associated with Increased Th1/Th17 and Reduced Th3 Cytokine Responses.. Clin cancer Res. (submitted)
Tittarelli A., Mendoza-Naranjo A., Ortíz C., López M. N., Salazar-Onfray F. Expression of connexin-43 affects human melanoma proliferative and metastatic capacity. Melanoma Res.  (submitted)
Tittarelli A., González F.E., Pereda C., Mora G., Muñoz L., Saffie C., García T., Díaz D., Falcón C., Hermoso M., López M.N., Salazar-Onfray F. (2012). Toll-Like Receptor 4 gene polymorphism influences dendritic cell in vitro function and clinical outcomes in vaccinated melanoma patients. Cancer Immunol. Immunother. (DOI: 10.1007/s00262-012-1268-7).

Mendoza-Naranjo A., Bouma G., Pereda C., Ramírez M., Webb K.F., Tittarelli A., López M. N., Kalergis A.M, Thrasher A.J., Becker D. L., Salazar-Onfray F. (2011). Functional gap junctions accumulate at the immunological synapse and regulate calcium signaling in T cells. J. Immunol. PMID: 21844382 ISI= 5,74

López M.N., Pesce B., Kurte M., Pérez C., Segal G., Roa J., Aguillón J.C., Mendoza-Naranjo A., Gesser B., Larsen C., Villablanca A., Choudhury A., Kiessling R., and Salazar-Onfray F. (2011). A synthetic peptide homologous to IL-10 functional domain induces monocyte diffrentiation to TGF-β tolerogenic dendritic cells. Immunobiology. 216(10):1117-26. ISI: 4,114

Aguilera R, Saffie C, Tittarelli A, González FE, Ramírez M, Reyes D, Pereda C, Hevia D, García T, Salazar L, Ferreira A, Hermoso M, Mendoza-Naranjo A, Ferrada C, Garrido P, López MN, and Salazar-Onfray F. (2011). Heat Shock Induction of Tumor-Derived Danger Signals Mediate Rapid Monocyte Differentiation to Clinically Effective Dendritic Cells. Clin Cancer Res. 17(8); 2474–83. ISI=6.8

López M N, Pereda C, Segal G, Muñoz L, Aguilera R, González F E., Escobar A, Ginesta A, Reyes D, González R, Larrondo M, Compán A, Ferrada C, Salazar-Onfray F. (2009). Prolonged survival of dendritic cell-vaccinated melanoma patients correlates with tumor-specific delayed type IV hypersensitivity response and reduction of tumor growth factor b-expressing T cells. J. Clin. Oncol. 27:945-52, ISI= 15.484 (22 citations)

Bueno SM, González PA, Carreño LJ, Tobar JA, Mora GC, Pereda CJ, Salazar-Onfray F, Kalergis AM. (2008). The capacity of Salmonella to survive inside dendritic cells and prevent antigen presentation to T cells is host specific. Immunology. 124 (4):522-33, ISI= 3.398 (14 citations)

Salazar L., Aravena O., Abello P., Escobar  A., Contreras-Levicoy  J., Rojas- Colonelli  N., Catalán  D., Aguirre  A., Zúñiga R., Pesce B., González  C., Cepeda R.,Cuchacovich M., Molina M.C., Salazar-Onfray F., Delgado M., Toes R.E., Aguillón J.C. (2008). Modulation of Established Murine Collagen-induced Arthritis by a Single Inoculation of Short-term Lipopolysaccharide-stimulated Dendritic Cells. Ann Rheum Dis. 67(9):1235-41. ISI= 6.411 (10 citations)

Mendoza-Naranjo A, Saéz P. J, Johansson C. C., Ramírez M., Mandaković D., Pereda C., López M. N., Kiessling R., Sáez J. C., Salazar-Onfray F. (2007). Functional GAP junctions facilitate melanoma antigen transfer and cross-presentation between human dendritic cells. J. Immunol. 178:6949-57. ISI= 6.068 (22 citations)

Salazar-Onfray F, Lopez MN, Mendoza-Naranjo A. (2007) Paradoxical effects of cytokines in tumor immune surveillance and tumor immune escape. Cytokine Growth Factor Rev. 18:171-82. ISI= 11.816 (31 citations)

Lopez MN, Pereda C, Ramirez M, Mendoza-Naranjo A, Serrano A, Ferreira A, Poblete R, Kalergis AM, Kiessling R, Salazar-Onfray F. (2007) Melanocortin 1 receptor is expressed by uveal malignant melanoma and can be considered a new target for diagnosis and immunotherapy. Invest Ophthalmol Vis Sci. ;48(3):1219-27.  ISI= 3.528 (4 citations)

Lopez M, Aguilera R, Perez C, Mendoza-Naranjo A, Pereda C, Ramirez M, Ferrada C, Aguillon JC, Salazar-Onfray F. (2006) The role of regulatory T lymphocytes in the induced immune response mediated by biological vaccines. Immunobiology. 211(1-2):127-36. ISI= 2.886 (26 citations)

Escobar A, Lopez M, Serrano A, Ramirez M, Perez C, Aguirre A, Gonzalez R, Alfaro J, Larrondo M, Fodor M, Ferrada C, Salazar-Onfray F.(2005) Dendritic cell immunizations alone or combined with low doses of interleukin-2 induce specific immune responses in melanoma patients. Clin Exp Immunol. Dec;142(3):555-68.  ISI= 2.599 (60 citations)

Lopez M, Escobar A, Alfaro J, Fodor M, Larrondo M, Ferrada C, Salazar-Onfray F. (2004) Advances in cellular immunotherapy for malignant melanoma Rev Med Chil. Sep;132(9):1115-26. ISI= 0.345 (1 citation)

Kurte M, Lopez M, Aguirre A, Escobar A, Aguillon JC, Charo J, Larsen CG, Kiessling R, Salazar-Onfray F. (2004) A synthetic peptide homologous to functional domain of human IL-10 down-regulates expression of MHC class I and Transporter associated with Antigen Processing 1/2 in human melanoma cells. J Immunol. Aug 1;173(3):1731-7.  ISI= 6.068 (25 citations)

Kono K, Salazar-Onfray F, Petersson M, Hansson J, Masucci G, Wasserman K, Nakazawa T, Anderson P, Kiessling R. (1996) Hydrogen peroxide secreted by tumor-derived macrophages down-modulates signal-transducing zeta molecules and inhibits tumor-specific T cell-and natural killer cell-mediated cytotoxicity. Eur J Immunol. Jun;26(6):1308-13 ISI=4.662 (242 citations)

Salazar-Onfray F, Petersson M, Franksson L, Matsuda M, Blankenstein T, Karre K, Kiessling R. (1995) IL-10 converts mouse lymphoma cells to a CTL-resistant, NK-sensitive phenotype with low but peptide-inducible MHC class I expression. J Immunol. Jun 15;154(12):6291-8.  ISI=6.068 (48 citations)

Matsuda M, Salazar F, Petersson M, Masucci G, Hansson J, Pisa P, Zhang QJ, Masucci MG, Kiessling R. (1994) Interleukin 10 pretreatment protects target cells from tumor- and allo-specific cytotoxic T cells and downregulates HLA class I expression.J Exp Med. 1994 Dec 1;180(6):2371-6.ISI=15.612 (214 citations)

– INTEGRANTES DEL GRUPO

Dr. Flavio Salazar Onfray
Jefe de grupo

Dr. Andrés Tittarelli
Postdoc

Cristian Pereda Ramos
Ingeniero en Biotecnología
Asistente de investigación y transferencia tecnológica

Tesistas Doctorado

Diego Reyes
Médico cirujano, especialista urología, PhD cand.

Paula Fluxa
Médico cirujano, especialista cirugía, PhD cand.

Carlos Saffie
Ingenierio en Biotecnología, Ingeniero civil industrial, PhD Cand.

Tamara García Salum
Bioquímica, PhD cand

Tesista de magister

Andrea Pardo
Médico cirujano

Tesista de pre-grado

Gabriela Mora Bau
Biotecnologa

Israel Guerrero
Biólogo

Personal técnico-profesional

Marisol Briones
Asistente de dirección

Manuel Salazar
Administración y finanzas

Félix Gonzalez
Asistente técnico

– Noticias o actividades de difusión

Contactar por favor a eugenio rivas eugenio.rivas@gmail.com para obtener información sobre noticias y difusión, fotografías infografías etc.